黄曲霉毒素是由黄曲霉菌和寄生曲霉产生的一类代谢产物,具有极强的毒性和致癌性,能引起多种动物发生癌变, 主要诱发肝癌。黄曲霉毒素广泛存在于粮油食品中,其中以花生和玉米污染最为严重,一般以热带和亚热带地区的饲料污染较重。由于它的剧毒性、强致癌性及存在的广泛性, 因此建立方便、 快速、 稳定的检测方法显得尤为重要。

　　目前黄曲霉毒素检测的国标方法有薄层色谱法、酶联免疫法、免疫亲和柱净化高效液相色谱法。薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长；而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高, 但特异性差；免疫亲和柱高效液相色谱法是柱后衍生法, 它对于高黄曲霉毒素含量的样品偏差较大,且柱后衍生不普及,给使用带来不便。

　　赛智科技应用检测部采用自制净化柱净化，柱前衍生方法对黄曲霉毒素衍生化处理，利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪和Waters 2475 多通道荧光检测器经实践检测可提供饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的同时测定的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，是一种很好的检测黄曲霉毒素的方法，仅供广大用户参考。

以下是饲料中黄曲霉毒素的测定的详细检测方法。

1仪器与试剂
1.1 仪器
LC-10Tvp高效液相色谱仪
Vertex 色谱柱　150mm×4.6mm×5μm
Waters 2475 多通道荧光检测器
自制净化柱
1.2 试剂
    甲醇，色谱纯。
    乙腈，色谱纯。
    三氟乙酸。
　正己烷。
　硅胶。
　中性氧化铝。
　聚酰胺粉。
    黄曲霉毒素标准样品：纯度≥99%。

2 试样溶液的制备
2.1 试样的提取和净化
使用粉碎机将饲料样品研细, 称取研细样品置于烧瓶或搅拌瓶中, 加入体积分数为84%的乙腈溶液, 在旋转震荡器上震荡。用漏斗、定性滤纸将其过滤到样品瓶中, 将过滤液通过自制净化柱净化, 弃去前面的, 然后将净化液转移至洁净的棕色瓶中, 在水浴60℃条件下用氮气吹干。
2.3 柱前衍生条件
向氮气吹干的剩余物中加入正己烷、三氟乙酸,立即旋紧盖子。涡旋, 在40℃烘箱中衍生，室温下氮气吹干混合物, 用体积分数为15%的乙腈溶液溶解残余物并涡旋,以3000 r/ min的速度离心,把已经制备净化好的样品液进样到液相色谱分析。

3 色谱条件
色谱柱：Vertex 色谱柱　150mm×4.6mm×5μm；
  流动相：乙腈溶液；
检测器：荧光检测器，波长：λEx= 360 nm , λEm = 440 nm；
  流速：1.0mL/min;
  温度：25℃；
  进样量：20μL。

4 液相色谱图
　　利用上述液相色谱条件，5种黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1在10 min内即可获得很好的分离效果。

在含有黄曲霉毒素B1的饲料样品中添加5种黄曲霉毒素,利用自制净化柱净化, 然后进样分析

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