近期，随着经济的复苏，维生素类饲料添加剂销售量大大增加，全球原料药大制造商帝斯曼最近也宣布对饲料维生素A涨价6%，所以饲料中维生素A的检测就显得非常紧急和重要。

　　赛智科技参考国标（GB/T 17817-2010），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪，经实践检测可提供饲料中维生素A的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素A的测定，仅供广大用户参考。

　　以下是维生素A的测定的详细检测方法。

1  仪器与试剂

1.1 仪器
　　LC-10Tvp高效液相色谱仪
　　Vertex 色谱柱　：150mm×4.6mm×5μm
　　分析天平，感量为分别为0.001g，0.0001g，0.00001g
　　圆底烧瓶，带回流冷凝器
　　恒温水浴锅
　　旋转蒸发器
　　超纯水器

1.2 试剂
　　无水乙醚:不含过氧化物。
　　无水乙醇。
　　正己烷，色谱纯。
　　异丙醇，色谱纯。
　　甲醇，色谱纯。
　　2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）。
　　无水硫酸钠。
　　氮气（纯度99%）。
　　碘化钾溶液。
　　淀粉指示液。
　　硫代硫酸钠溶液。
　　氢氧化钾溶液。
　　L-抗坏血酸纯品。
　　酚酞指示剂。
　　1,4-二氧六环。
　　维生素A乙酸酯标准品：含量≥99%。
　　维生素A标准贮备液。
　　维生素A标准工作液。

2  试样溶液的制备

2.1 皂化
　　称取试样配合饲料或浓缩饲料适量，置入圆底烧瓶中，加L-坏血酸乙醇溶液，使试样完全分散、浸湿，加氢氧化钾溶液，混匀，置于水浴上回流，不时震荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用无水乙醇、水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至40℃。

2.2  提取
　　定量转移全部皂化液于盛有无水乙醚的分液漏斗中，用蒸馏水分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气，随后混合，激烈震荡，静置、分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分次用乙醚重复提取两次，弃去水相，合并三次乙醚相。用蒸馏水多次洗涤乙醚提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化。乙醚提取液通过无水硫酸钠脱水，转移到棕色容量瓶中，加BHT使之溶解，用乙醚定容至刻度。以上操作均在避光通风柜内进行。

2.3  浓缩
　　从乙醚提取液中分取一定体积置于旋转蒸发器烧瓶中，在水浴温度约50℃，部分真空条件下蒸发至干或用氮气吹干。残渣用甲醇溶解并稀释，离心或通过0.45μm过滤膜过滤，用于高效液相色谱仪分析。以上操作均在避光通风柜内进行。

3  色谱条件
　 色谱柱：Vertex 色谱柱　150mm×4.6mm×5μm；
　 流动相：甲醇+水=95+5；
　 流速：1.0mL/min;
　 温度：室温；
　 进样量：20μL。
　 检测波长：326nm。

4  维生素A标准高效液相色谱图。