为食品加工工艺和防腐的需要，以及为了改善食品品质和色、味、香，在食品生产加工过程中，食品中通常会加入少量的天然或者化学合成的物质。最近几年，由于食品安全问题层出不穷，人们越来越重视食品添加剂所带来的安全隐患。

　　赛智科技参考国标（GB/T 23495-2009），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪，经实践检测可提供苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于食品中苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的测定，仅供广大用户参考。

　　以下是苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的详细检测方法。

1　 仪器与试剂

1.1  仪器
　　LC-10Tvp高效液相色谱仪
　　Vertex 色谱柱　250mm×4.6mm×5μm；
　　超声波水浴振荡器；
　　食品粉碎机；
　　pH计；
　　天平：分度值为0.001 mg。

1.2  试剂
　　甲醇：色谱纯。
　　乙酸铵溶液：称取1.54 g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000 mL，经0.45μm微孔滤膜过滤。
　　亚铁氰化钾溶液：称取106 g亚铁氰化钾[K3Fe(CN)6•3H2O]加水至1000 mL。
　　乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2•2H20]溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，加水稀释至l000mL。
　　氨水(1+1)：氨水与水等体积混合。

2　 色谱条件

　　色谱柱：Vertex C18柱，250mm x 4.6 mm，5μm；
　　流动相：甲醇+0.02mol/l乙酸铵溶液(5:95)；
　　流速：1 mL／min；
　　进样量：20μL；
　　检测波长230nm。

3　 试样溶液的制备

3.1  含脂肪、蛋白的样品
　　称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后用转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；
　　加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，摇匀；
　　根据PH计读数，用氨水调节PH至接近中性；
　　用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；
　　吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

3.2  不含脂肪、蛋白的样品
　　称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；
　　根据PH计读数，用氨水调节PH至接近中性；
　　用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；
　　吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；

混合标准溶液色谱图

 

4　 结果分析
4.1  仪器精密度的测定
　　取浓度为苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度为10.0ug/ml，平行测定7次。
 

表1：精密度的测定结果

序号	峰面积/uv.s
	苯甲酸	山梨酸	糖精钠	安赛蜜
1	1237675	1744586	768546	1000489
2	1237589	1744531	768478	1000319
3	1237693	1744387	768587	1000233
4	1237731	1744436	768673	1000521
5	1237718	1744801	768831	1000871
6	1237667	1744603	768471	1000432
7	1237608	1744498	768422	1000477
平均值	1237668.7	1744548.9	768572.6	1000477.4
S	53.2	135.2	141.3	201.6
RSD/%	0.004	0.007	0.2	0.02

分析结果可以得出，每个组分峰面积的相对标准偏差均小于1％，表明仪器在选定条件下重现性好，完全可以满足分析测定的要求。

4.2  回收率的测定
　　分析结果的准确度可以用回收率来衡量。回收率越接近100％，测得的结果越接近真值，即准确度越好。同时平行测定结果的相对标准偏差可以表明方法的重现性。

　　取清凉茶、样品分别进行加标实验，加入苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度均为10.00ug/ml标准溶液，平行测样7次，进行回收率实验。测定结果见表2。

表2：清凉茶的加标测定结果和回收率

序号	样品测定值g／mL				加标后测定值μg／mL				回收率/%
	苯甲酸	山梨酸	糖精钠	安赛蜜	苯甲酸	山梨酸	糖精钠	安赛蜜	苯甲酸	山梨酸	糖精钠	安赛蜜
1	13.80	---	7.00	2.40	23.76	10.21	17．43	12.73	99.6	102.1	104.3	103.3
2					24.05	10.11	16.75	12.66	102.5	101.1	97.5	102.6
3					23.93	9.83	16.81	12.31	101.3	98.3	98.1	99.1
4					23.84	10.31	16.93	12.24	100.4	103.1	99.3	98.4
5					23.65	9．94	17．04	12.32	98.5	99.4	100.4	99.2
6					24.14	10.13	17.21	12.58	103.4	101.3	102.1	101.8
7					23.72	10.19	16.97	12.44	99.2	101.9	99.7	100．4

从上表可以看出清凉茶的加标测定的回收率：苯甲酸为98.5%-103.4%，山梨酸为98.3%-103.1%，糖精钠为97.5%-104.3%,安赛蜜为98.4%-103.3%。各组分的回收率都接近100%，满足日常检测的要求。