资料介绍
1引用标准
按照国家标准GB/T 22388-2008，三聚氰胺简称三胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料。因三聚氰胺分子中含有大量氮元素，一些不法厂商通过添加这种化工原料，提高产品中蛋白质含量。
2方法原理：
采用HPLC法测定三聚氰胺，成本低，不需要衍生，简便易行。采用外标法进行定量分析。
本方法采用南京科捷LC-600二元高压梯度，按照国家标准GB/T 22388-2008对牛奶中三聚氰胺进行检测。该方法稳定可靠，检测范围广泛。
3. 仪器和试剂
LC-600二元高压梯度系统：输液泵，配梯度单元和在线脱气装置；LC-600紫外检测器；手动进样器7725i，色谱工作站N2000P,离心机1台（转头6*50ml）；固相萃取小柱和萃取装置；氮吹仪；
三聚氰胺对照品购自sigma公司，样品液态奶购买于超市，实验中用到的其他试剂如三氯乙酸、氢氧化钠、柠檬酸和辛烷磺酸钠均为分析级。
4. 色谱条件
色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm （也可选用C8柱）
缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM辛烷磺酸钠
流动相：缓冲溶液:乙腈=90：10
进样量：20uL
流 速：1.0mL/min
柱 温：40℃
5. 样品制备
按照GB/T 22388-2008中3.4节进行：称取2g（精确到0.01g）试样（液态纯牛奶）于50mL具塞塑料离心管中，加入15ml 1%三氯乙酸提取液和5mL乙腈，充分混匀，超声提取20min，再振荡提取10min后，以4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，过混合型阳离子固相萃取小柱(PCX)。洗脱液于50℃下氮气吹干，残留物用20%甲醇的水溶液定容至1mL。
6. 定性分析
称取三聚氰胺标准品适量，流动相溶解，按照上述色谱条件，进入色谱仪分析。保留时间分别为4.75min。
7. 样品测试
按照上述样品处理方法和色谱条件，对样品进行测定，得到色谱图如图1所示。平行测试4次，计算平均峰面积，并以外标法对三聚氰胺的含量进行计算。结果得出样品中含三聚氰胺1.029mg/L。
图1 牛奶中三聚氰胺测试典型谱图
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